化學(xué)藥物質(zhì)量控制分析方法驗(yàn)證技術(shù)指
指導(dǎo)原則編號(hào)： 【 |H |】 |G |P |H |5 |- |1 | |化學(xué)藥物質(zhì)量控制分析方法驗(yàn)證 技術(shù)指導(dǎo)原則 二○○四年十一月 目 錄 一、概述 1 二、方法驗(yàn)證的一般原則 2 三、方法驗(yàn)證涉及到的三個(gè)主要方面 2 （一）需要驗(yàn)證的檢測(cè)項(xiàng)目 2 （二）分析方法 3 （三）驗(yàn)證內(nèi)容 3 四、方法驗(yàn)證的具體內(nèi)容 3 （一）專(zhuān)屬性 3 1、鑒別反應(yīng) 3 2、雜質(zhì)檢查 4 3、含量測(cè)定 4 （二）線性 5 （三）范圍 5 1、含量測(cè)定 5 2、制劑含量均勻度 5 3、溶出度或釋放度 6 4、雜質(zhì) 6 （四）準(zhǔn)確度 6 1、含量測(cè)定 6 2、雜質(zhì)定量試驗(yàn) 7 （五）精密度 7 1、重復(fù)性 7 2、中間精密度 8 3、重現(xiàn)性 8 （六）檢測(cè)限 8 1、直觀法 8 2、信噪比法 8 （七）定量限 9 1、直觀法 9 2、信噪比法 9 （八）耐用性 10 （九）系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 10 五、方法再驗(yàn)證 10 六、方法驗(yàn)證的評(píng)價(jià) 11 （一）有關(guān)方法驗(yàn)證評(píng)價(jià)的一般考慮 11 （二）方法驗(yàn)證的整體性和系統(tǒng)性 12 七、參考文獻(xiàn) 12 八、著者 12 化學(xué)藥物質(zhì)量控制分析方法驗(yàn)證技術(shù)指導(dǎo)原則起草說(shuō)明 13 化學(xué)藥物質(zhì)量控制分析方法驗(yàn)證技術(shù)指導(dǎo)原則 一、概述 保證藥品安全、有效、質(zhì)量可控是藥品研發(fā)和評(píng)價(jià)應(yīng)遵循的基本原則，其中，對(duì)藥 品進(jìn)行質(zhì)量控制是保證藥品安全有效的基礎(chǔ)和前提。為達(dá)到控制質(zhì)量的目的，需要多角 度、多層面來(lái)控制藥品質(zhì)量，也就是說(shuō)要對(duì)藥物進(jìn)行多個(gè)項(xiàng)目測(cè)試，來(lái)全面考察藥品質(zhì) 量。一般地，每一測(cè)試項(xiàng)目可選用不同的分析方法，為使測(cè)試結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，必須對(duì) 所采用的分析方法的科學(xué)性、準(zhǔn)確性和可行性進(jìn)行驗(yàn)證，以充分表明分析方法符合測(cè)試 項(xiàng)目的目的和要求，這就是通常所說(shuō)的對(duì)方法進(jìn)行驗(yàn)證。 方法驗(yàn)證的目的是判斷采用的分析方法是否科學(xué)、合理，是否能有效控制藥品的內(nèi) 在質(zhì)量。從本質(zhì)上講，方法驗(yàn)證就是根據(jù)檢測(cè)項(xiàng)目的要求，預(yù)先設(shè)置一定的驗(yàn)證內(nèi)容， 并通過(guò)設(shè)計(jì)合理的試驗(yàn)來(lái)驗(yàn)證所采用的分析方法能否符合檢測(cè)項(xiàng)目的要求。 方法驗(yàn)證在分析方法建立過(guò)程中具有重要的作用，并成為質(zhì)量研究和質(zhì)量控制的組 成部分。只有經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的分析方法才能用于控制藥品質(zhì)量，因此方法驗(yàn)證是制訂質(zhì)量標(biāo) 準(zhǔn)的基礎(chǔ)。方法驗(yàn)證是藥物研究過(guò)程中的重要內(nèi)容。 本指導(dǎo)原則重點(diǎn)探討方法驗(yàn)證的本質(zhì)，將分析方法驗(yàn)證的要求與所要達(dá)到的目的結(jié) 合起來(lái)進(jìn)行系統(tǒng)和規(guī)律性的闡述，重點(diǎn)闡述如何科學(xué)合理地進(jìn)行論證方案的設(shè)計(jì)。 本指導(dǎo)原則主要包括方法驗(yàn)證的一般原則、方法驗(yàn)證涉及的三個(gè)主要方面、方法驗(yàn) 證的具體內(nèi)容、對(duì)方法驗(yàn)證的評(píng)價(jià)等內(nèi)容。 本原則與其他相關(guān)技術(shù)指導(dǎo)原則一起構(gòu)成較完整的質(zhì)量控制指導(dǎo)原則。 隨著我國(guó)新藥研發(fā)水平的不斷提高，對(duì)方法驗(yàn)證的認(rèn)識(shí)也會(huì)不斷深入，本指導(dǎo)原則 將會(huì)逐步完善和修訂。 由于生物制品和中藥的特殊性，本原則主要適用于化學(xué)藥品。 二、方法驗(yàn)證的一般原則 原則上每個(gè)檢測(cè)項(xiàng)目采用的分析方法，均需要進(jìn)行方法驗(yàn)證。 方法驗(yàn)證的內(nèi)容應(yīng)根據(jù)檢測(cè)項(xiàng)目的要求，結(jié)合所采用分析方法的特點(diǎn)確定。 同一分析方法用于不同的檢測(cè)項(xiàng)目會(huì)有不同的驗(yàn)證要求。例如，采用高效液相色譜 法用于制劑的鑒別和雜質(zhì)定量試驗(yàn)應(yīng)進(jìn)行不同要求的方法驗(yàn)證，前者重點(diǎn)要求驗(yàn)證專(zhuān)屬 性，而后者重點(diǎn)要求驗(yàn)證專(zhuān)屬性、準(zhǔn)確度、定量限。 三、方法驗(yàn)證涉及的三個(gè)主要方面 （一）需要驗(yàn)證的檢測(cè)項(xiàng)目 檢測(cè)項(xiàng)目是為控制藥品質(zhì)量，保證安全有效而設(shè)定的測(cè)試項(xiàng)目。根據(jù)檢測(cè)項(xiàng)目的設(shè) 定目的和驗(yàn)證內(nèi)容的不同要求，本指導(dǎo)原則將需驗(yàn)證的檢測(cè)項(xiàng)目分為鑒別、雜質(zhì)檢查（ 限度試驗(yàn)、定量試驗(yàn)）、定量測(cè)定（含量測(cè)定、溶出度、釋放度等）、其他特定檢測(cè)項(xiàng) 目等四類(lèi)。 鑒別的目的在于判定被分析物是目標(biāo)化合物，而非其它物質(zhì)，用于鑒別的分析方法 要求具有較強(qiáng)的專(zhuān)屬性。 雜質(zhì)檢查主要用于控制主成分以外的雜質(zhì)，如有機(jī)雜質(zhì)、無(wú)機(jī)雜質(zhì)等。雜質(zhì)檢查可 分為限度試驗(yàn)和定量試驗(yàn)兩種情況。用于限度試驗(yàn)的分析方法驗(yàn)證側(cè)重專(zhuān)屬性和檢測(cè)限 。用于定量試驗(yàn)的分析方法驗(yàn)證強(qiáng)調(diào)專(zhuān)屬性、準(zhǔn)確度和定量限。 定量測(cè)定包括含量測(cè)定、制劑的溶出度測(cè)定等，由于此類(lèi)項(xiàng)目對(duì)準(zhǔn)確性要求較高， 故所采用的分析方法要求具有一定的專(zhuān)屬性、準(zhǔn)確度和線性。 其他特定檢測(cè)項(xiàng)目包括粒徑分布、旋光度、分子量分布等，由于這些檢測(cè)項(xiàng)目的要 求與鑒別、雜質(zhì)檢查、定量測(cè)定等有所不同，對(duì)于這些項(xiàng)目的分析方法驗(yàn)證應(yīng)有不同的 要求。 （二）分析方法 本指導(dǎo)原則所指分析方法是為完成上述各檢測(cè)項(xiàng)目而設(shè)定和建立的測(cè)試方法，一般 包括分析方法原理、儀器及儀器參數(shù)、試劑、系統(tǒng)適用性試驗(yàn)、供試品溶液制備、對(duì)照 品溶液制備、測(cè)定、計(jì)算及測(cè)試結(jié)果的報(bào)告等。 測(cè)試方法可采用化學(xué)分析方法和儀器分析方法。這些方法各有特點(diǎn)，同一測(cè)試方法 可用于不同的檢測(cè)項(xiàng)目，但驗(yàn)證內(nèi)容可不相同。 （三）驗(yàn)證內(nèi)容 驗(yàn)證內(nèi)容包括方法的專(zhuān)屬性、線性、范圍、準(zhǔn)確度、精密度、檢測(cè)限、定量限、耐 用性和系統(tǒng)適用性等。 四、方法驗(yàn)證的具體內(nèi)容 （一）專(zhuān)屬性 專(zhuān)屬性系指在其他成分（如雜質(zhì)、降解物、輔料等）可能存在下，采用的分析方法 能夠正確鑒定、檢出被分析物質(zhì)的特性。 通常，鑒別、雜質(zhì)檢查、含量測(cè)定方法中均應(yīng)考察其專(zhuān)屬性。如采用的方法不夠?qū)?屬，應(yīng)采用多個(gè)方法予以補(bǔ)充。 1、鑒別反應(yīng) 鑒別試驗(yàn)應(yīng)確證被分析物符合其特征。專(zhuān)屬性試驗(yàn)要求證明能與可能共存的物質(zhì)或 結(jié)構(gòu)相似化合物區(qū)分，需確證含被分析物的供試品呈正反應(yīng)，而不含被測(cè)成分的陰性對(duì) 照呈負(fù)反應(yīng)，結(jié)構(gòu)相似或組分中的有關(guān)化合物也應(yīng)呈負(fù)反應(yīng)。 2、雜質(zhì)檢查 作為純度檢查，所采用的分析方法應(yīng)確?？蓹z出被分析物中雜質(zhì)的含量，如有關(guān)物質(zhì)、 重金屬、有機(jī)溶劑等。因此雜質(zhì)檢查要求分析方法有一定的專(zhuān)屬性。 在雜質(zhì)可獲得的情況下，可向供試品中加入一定量的雜質(zhì)，證明雜質(zhì)與共存物質(zhì)能 得到分離和檢出，并具適當(dāng)?shù)臏?zhǔn)確度與精密度。 在雜質(zhì)或降解產(chǎn)物不能獲得的情況下，專(zhuān)屬性可通過(guò)與另一種已證明合理但分離或 檢測(cè)原理不同、或具較強(qiáng)分辨能力的方法進(jìn)行結(jié)果比較來(lái)確定。或?qū)⒐┰嚻酚脧?qiáng)光照射 ，高溫，高濕，酸、堿水解及氧化的方法進(jìn)行破壞（制劑應(yīng)考慮輔料的影響），比較破 壞前后檢出的雜質(zhì)個(gè)數(shù)和量。必要時(shí)可采用二極管陣列檢測(cè)和質(zhì)譜檢測(cè)，進(jìn)行色譜峰純 度檢查。 3、含量測(cè)定 含量測(cè)定目的是得到供試品中被分析物的含量或效價(jià)的準(zhǔn)確結(jié)果。 在雜質(zhì)可獲得的情況下，對(duì)于主成分含量測(cè)定可在供試品中加入雜質(zhì)或輔料，考察測(cè)定 結(jié)果是否受干擾，并與未加雜質(zhì)和輔料的供試品比較測(cè)定結(jié)果。 在雜質(zhì)或降解產(chǎn)物不能獲得的情況下，可采用另一個(gè)經(jīng)驗(yàn)證了的或藥典方法進(jìn)行比 較，比對(duì)兩種方法測(cè)定的結(jié)果。也可采用破壞性試驗(yàn)（強(qiáng)光照射，高溫，高濕，酸、堿 水解及氧化），得到含有雜質(zhì)或降解產(chǎn)物的試樣，用兩種方法進(jìn)行含量測(cè)定比較測(cè)定結(jié) 果。必要時(shí)進(jìn)行色譜峰純度檢查，證明含量測(cè)定成分的色譜峰中不包含其他成分。 （二）線性 線性系指在設(shè)計(jì)的測(cè)定范圍內(nèi)，檢測(cè)結(jié)果與供試品中被分析物的濃度（量）直接呈 線性關(guān)系的程度。 線性是定量測(cè)定的基礎(chǔ)，涉及定量測(cè)定的項(xiàng)目，如雜質(zhì)定量試驗(yàn)和含量測(cè)定均需要 驗(yàn)證線性。 應(yīng)在設(shè)計(jì)的測(cè)定范圍內(nèi)測(cè)定線性關(guān)系?？捎靡毁A備液經(jīng)精密稀釋?zhuān)蚍謩e精密稱樣 ，制備一系列被測(cè)物質(zhì)濃度系列進(jìn)行測(cè)定，至少制備5個(gè)濃度。以測(cè)得的響應(yīng)信號(hào)作為被 測(cè)物濃度的函數(shù)作圖，觀察是否呈線性，用最小二乘法進(jìn)行線性回歸。 必要時(shí)，響應(yīng)信號(hào)可經(jīng)數(shù)學(xué)轉(zhuǎn)換，再進(jìn)行線性回歸計(jì)算，并說(shuō)明依據(jù)。 （三）范圍 范圍系指能夠達(dá)到一定的準(zhǔn)確度、精密度和線性，測(cè)試方法適用的試樣中被分析物 的高低限濃度或量的區(qū)間。 范圍是規(guī)定值，在試驗(yàn)研究開(kāi)始前應(yīng)確定驗(yàn)證的范圍和試驗(yàn)方法?？梢圆捎梅弦?求的原料藥配制成不同的濃度，按照相應(yīng)的測(cè)定方法進(jìn)行試驗(yàn)。 范圍通常用與分析方法的測(cè)試結(jié)果相同的單位（如百分濃度）表達(dá)。涉及到定量測(cè) 定的檢測(cè)項(xiàng)目均需要對(duì)范圍進(jìn)行驗(yàn)證，如含量測(cè)定、含量均勻度、溶出度或釋放度、雜 質(zhì)定量試驗(yàn)等。 范圍應(yīng)根據(jù)劑型和（或）檢測(cè)項(xiàng)目的要求確定。 1、含量測(cè)定 范圍應(yīng)為測(cè)試濃度的80％～100％或更寬。 2、制劑含量均勻度 范圍應(yīng)為測(cè)試濃度的70％～130％。根據(jù)劑型特點(diǎn)，如氣霧劑、噴霧劑，必要時(shí)，范 圍可適當(dāng)放寬。 3、溶出度或釋放度 對(duì)于溶出度，范圍應(yīng)為限度的±20％；如規(guī)定限度范圍，則應(yīng)為下限的- 20％至上限的+20％。 對(duì)于釋放度，如規(guī)定限度范圍為，從1小時(shí)后為20％至24小時(shí)后為90％，則驗(yàn)證范圍 應(yīng)為0～110％。 4、雜質(zhì) 雜質(zhì)測(cè)定時(shí)，范圍應(yīng)根據(jù)初步實(shí)測(cè)結(jié)果，擬訂出規(guī)定限度的±20％。如果含量測(cè)定與 雜質(zhì)檢查同時(shí)測(cè)定，用面積歸一化法，則線性范圍應(yīng)為雜質(zhì)規(guī)定限度的- 20％至含量限度（或上限）的+20％。 （四）準(zhǔn)確度 準(zhǔn)確度系指用該方法測(cè)定的結(jié)果與真實(shí)值或認(rèn)可的參考值之間接近的程度。有時(shí)也 稱真實(shí)度。 一定的準(zhǔn)確度為定量測(cè)定的必要條件，因此涉及到定量測(cè)定的檢測(cè)項(xiàng)目均需要驗(yàn)證 準(zhǔn)確度，如含量測(cè)定、雜質(zhì)定量試驗(yàn)等。 準(zhǔn)確度應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)建立，對(duì)于制劑一般以回收率試驗(yàn)來(lái)進(jìn)行驗(yàn)證。試驗(yàn)設(shè)計(jì) 需考慮在規(guī)定范圍內(nèi)，制備3個(gè)不同濃度的試樣，各測(cè)定3次，即測(cè)定9次，報(bào)告已知加入 量的回收率（％）或測(cè)定結(jié)果平均值與真實(shí)值之差及其可信限。 1、含量測(cè)定 原料藥可用已知純度的對(duì)照品或符合要求的原料藥進(jìn)行測(cè)定，或用本法所得結(jié)果與 已建立準(zhǔn)確度的另一方法測(cè)定的結(jié)果進(jìn)行比較。 制劑可用含已知量被測(cè)物的各組分混合物進(jìn)行測(cè)定。如不能得到制劑的全部組分， 可向制劑中加入已知量的被測(cè)物進(jìn)行測(cè)定，必要時(shí)，與另一個(gè)已建立準(zhǔn)確度的方法比較 結(jié)果。 2、雜質(zhì)定量試驗(yàn) 雜質(zhì)的定量試驗(yàn)可向原料藥或制劑中加入已知量雜質(zhì)進(jìn)行測(cè)定。如果不能得到雜質(zhì) ，可用本法測(cè)定結(jié)果與另一成熟的方法進(jìn)行比較，如藥典方法或經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的方法。 如不能測(cè)得雜質(zhì)的相對(duì)響應(yīng)因子，可在線測(cè)定雜質(zhì)的相關(guān)數(shù)據(jù)，如采用二極管陣列 檢測(cè)器測(cè)定紫外光譜，當(dāng)雜質(zhì)的光譜與主成分的光譜相似，則可采用原料藥的響應(yīng)因子 近似計(jì)算雜質(zhì)含量（自身對(duì)照法）。并應(yīng)明確單個(gè)雜質(zhì)和雜質(zhì)總量相當(dāng)于主成分的重量 比（％）或面積比（％）。 （五）精密度 精密度系指在規(guī)定的測(cè)試條件下，同一均質(zhì)供試品，經(jīng)多次取樣進(jìn)行一系列檢測(cè)所 得結(jié)果之間的接近程度（離散程度）。 精密度一般用偏差、標(biāo)準(zhǔn)偏差或相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差表示。用標(biāo)準(zhǔn)偏差或相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差表 示時(shí)，取樣測(cè)定次數(shù)應(yīng)至少6次。 精密度可以從三個(gè)層次考察：重復(fù)性、中間精密度、重現(xiàn)性。 1、重復(fù)性 重復(fù)性系指在同樣的操作條件下，在較短時(shí)間間隔內(nèi)，由同一分析人員測(cè)定所得結(jié) 果的精密度。 重復(fù)性測(cè)定可在規(guī)定范圍內(nèi)，至少用9次測(cè)定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)，如制備3個(gè)不同濃度的 試樣，各測(cè)定3次，或100％的濃度水平，用至少測(cè)定6次的結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)。 2、中間精密度 中間精密度系指在同一實(shí)驗(yàn)室，由于實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部條件改變，如時(shí)間、分析人員、儀 器設(shè)備、測(cè)定結(jié)果的精密度。 驗(yàn)證設(shè)計(jì)方案中的變動(dòng)因素一般為日期、分析人員、設(shè)備。 3、重現(xiàn)性 指不同實(shí)驗(yàn)室之間不同分析人員測(cè)定結(jié)果的精密度。 當(dāng)分析方法將被法定標(biāo)準(zhǔn)采用時(shí)，應(yīng)進(jìn)行重現(xiàn)性試驗(yàn)。 （六）檢測(cè)限 檢測(cè)限系指試樣中的被分析物能夠被檢測(cè)到的最低量，但不一定要準(zhǔn)確定量。 該驗(yàn)證指標(biāo)的意義在于考察方法是否具備靈敏的檢測(cè)能力。因此對(duì)雜質(zhì)限度試驗(yàn)， 需證明方法具有足夠低的檢測(cè)限，以保證檢出需控制的雜質(zhì)。 1、直觀法 直觀評(píng)價(jià)可以用于非儀器分析方法，也可用于儀器分析方法。 檢測(cè)限的測(cè)定是通過(guò)對(duì)一系列已知濃度被測(cè)物的試樣進(jìn)行分析，并以能準(zhǔn)確、可靠 檢測(cè)被測(cè)物的最小量或最低濃度來(lái)建立。 2、信噪比法 用于能顯示基線噪音的分析方法，即把已知低濃度試樣測(cè)出的信號(hào)與噪聲信號(hào)進(jìn)行 比較，計(jì)算可檢出的最低濃度或量。一般以信噪比為3：1時(shí)相應(yīng)的濃度或注入儀器的量 確定檢測(cè)限。 其他方法有基于工作曲線的斜率和響應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)偏差進(jìn)行計(jì)算的方法等。 無(wú)論用何種方法，均應(yīng)用一定數(shù)量的試樣，其濃度為近于或等于檢測(cè)限，進(jìn)行分析 ，以可靠地測(cè)定檢測(cè)限。 （七）定量限 定量限系指試樣中的被分析物能夠被定量測(cè)定的最低量，其測(cè)定結(jié)果應(yīng)具有一定的 準(zhǔn)確度和精密度。 定量限體現(xiàn)了分析方法是否具備靈敏的定量檢測(cè)能力。雜質(zhì)定量試驗(yàn)，需考察方法 的定量限，以保證含量很少的雜質(zhì)能夠被準(zhǔn)確測(cè)出。 常用信噪比法確定定量限。一般以信噪比為10：1時(shí)相應(yīng)的濃度或注入儀器的量進(jìn)行 確定。 1、直觀法 直觀評(píng)價(jià)可以用于非儀器分析方法，也可用于儀器分析方法。 定量限一般通過(guò)對(duì)一系列含有已知濃度被測(cè)物的試樣進(jìn)行分析，在準(zhǔn)確度和精密度 都符合要求的情況下，來(lái)確定被測(cè)物能被定量的最小量...
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